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Grapevine Fanleaf Degeneration - Controlando o Grapevine Fanleaf Virus

Grapevine Fanleaf Degeneration - Controlando o Grapevine Fanleaf Virus


Por: Kristi Waterworth

Penduradas em treliças e caramanchões, as uvas fornecem uma bela cobertura de folhas e frutas abundantes quando estão felizes e saudáveis. Infelizmente, os problemas da uva, como o vírus da folha em leque da videira, não são incomuns, tornando o cultivo de uvas um desafio significativo. Se você suspeita de degeneração em folha em folha de uvas em seu vinhedo ou jardim, continue lendo para obter informações mais valiosas.

Grapevine Fanleaf Degeneration

A degeneração em folha em leque da videira é um vírus comum da videira transmitido por nematóides adaga. Não é apenas uma das doenças virais mais graves da uva, mas também a mais antiga que se conhece, com descrições que remontam a 1841. Qualquer espécie de uva pode ser infectada, mas Vitis vinifera, Vitis rupestris e seus híbridos são os mais suscetíveis. Você deve estar alerta para esta doença em qualquer lugar que cresça uvas, especialmente em estados com infecções conhecidas como Califórnia, Washington, Maryland, Pensilvânia, Nova York e Missouri.

As plantas infectadas freqüentemente apresentam um declínio lento e dificuldade para dar frutos, mas quase sempre apresentam uma deformidade foliar característica. As folhas afetadas exibem uma forma em leque devido a anormalidades na formação de nervuras e coloração amarela em um padrão de mosaico ou em faixas ao longo das nervuras principais. Esta coloração amarela geralmente aparece no verão.

Controle do vírus Grapevine Fanleaf

Se suas uvas já estão infectadas com o vírus da folha em leque da uva, é tarde demais para fazer qualquer coisa sobre esta trágica doença, mas você pode prevenir a infecção em plantas saudáveis ​​praticando uma boa higiene das ferramentas entre todas as suas plantas. No futuro, você pode evitar essa doença plantando videiras certificadas livres de doenças com porta-enxertos resistentes a nematóides em solo novo, longe do local de suas uvas infectadas.

Embora a disseminação do vírus seja incomum na horta doméstica, quanto melhor for o seu saneamento e manejo, menos provável que o vírus da folha em leque da videira se torne um problema doméstico. Mantenha as ervas daninhas rigidamente controladas ao redor de qualquer plantação de uva para eliminar as plantas do vetor e replantar as áreas de uva densamente com plantas nematicidas, como calêndulas francesas, para ajudar a destruir os nematóides que transmitem esta doença prontamente.

A verdadeira resistência ao vírus ainda não está disponível na criação de uvas, portanto, uma abordagem combinada para o controle do vírus da folha em leque da uva é sua melhor aposta se você espera cultivar uvas com sucesso em sua horta. Sempre mantenha suas ferramentas esterilizadas e estoque limpo e resistente. Além disso, observe os sinais de doenças e remova todas as plantas suspeitas imediatamente para obter os melhores resultados.

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GRAPEVINE FANLEAF VIRUS PDF

A infecção por Grapevine fanleaf nepovirus (GFLV), um vírus de RNA bipartido de polaridade positiva pertencente à família Comoviridae, causa extensa citopatia. A transmissão específica do Grapevine fanleaf virus pelo seu índice de vetor nematóide Xiphinema é exclusivamente determinada pela proteína do revestimento viral. Existem muitos vírus de plantas dos quais ninguém ouviu falar, mas poucos são tão amplamente conhecidos como vírus da folha em leque da videira. Aprenda a identificar um doente.

Autor: Zulkizuru Tazshura
País: Cazaquistão
Língua: Inglês espanhol)
Gênero: Meio Ambiente
Publicado (último): 28 de setembro de 2015
Páginas: 370
Tamanho do arquivo PDF: 13,8 Mb
Tamanho do arquivo ePub: 9,88 Mb
ISBN: 119-6-70827-416-4
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Preço: Livre* [* É necessário registro gratuito]
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Fanleaf DegenerationPurdue University. Esse paralelismo não é inesperado, uma vez que CPMV e GFLV pertencem à mesma família e compartilham muitas características comuns, entre elas uma organização genômica semelhante 2. As pontas de seta nos painéis B, C, E e F indicam o compartimento viral perinuclear.

Para o vírus do mosaico do feijão-caupi, a acumulação induzida pelo vírus CPMV de vesículas derivadas do sistema de endomembrana foi descrita já por de Zoeten et al. Embora alguns centros fanlewf tenham sido encontrados na região perinuclear rica em RE, muitos deles permaneceram periféricos.


Grapevine fanleaf virus

Essas estruturas continham VPg como um produto de maturação final ou, mais provavelmente, como precursores de poliproteína envolvidos na replicação do RNA e poderiam ter a forma de um anel ou uma capa ou aparecer multilobulada.

As células foram fixadas com glutaraldeído, permeabilizadas, extintas com NaBH 4 e tratadas com anticorpos primários, seguido de tratamento com anticorpos secundários acoplados aos fluorocromos Ab1 e Ab2.

Nossa hipótese é que a porção grapevind da poliproteína P2 poderia mediar o transporte dos complexos nascentes Grapevone de sua localização inicial no citosol para os locais de replicação perinuclear onde a replicação de RNA2 e clivagem P2 ocorrem. RNA1 codifica a poliproteína P1 kDawhich é processada por uma atividade de proteinase incorporada em cinco proteínas necessárias para a replicação, a saber, 1A de função desconhecida1B provavelmente a helicase1C VPg1D proteinaseae 1E polimerase 38 Para demonstrar se os agregados derivados de ER estavam envolvidos na replicação viral, experimentos de dupla marcação foram realizados com anticorpos anti-dsRNA e anti-VPg .

Nenhum agregado de VPg foi observado em protoplastos de controle não infectados ou transfectados de forma simulada, como mostrado na Fig.

Grades de microscopia eletrônica revestidas com Formvar foram primeiro revestidas com anticorpos anti-VPg imunopurificados por afinidade e, em seguida, flutuadas em alíquotas das frações de gradiente combinadas três por três.

Uma proteína viral humana, a proteína poliovírus 2BC, induz a proliferação da membrana e bloqueia a via exocítica na levedura Saccharomyces cerevisiae. Tais complexos provavelmente asseguram a proteção do RNA viral que está sendo sintetizado da degradação por RNases celulares.

48 horas após a eletroporação, os protoplastos foram fixados com glutaraldeído como segue. Entrada do PDB 2y26 [1] Grupo de classificação de vírus: A qualidade da fruta é afetada devido a uma diminuição no teor de açúcar e na acidez titulável.

A doença degenerativa em folha de leque é causada pelo vírus da folha de leque da videira GFLVa, membro do grupo dos nepovírus. Em contraste com as proteínas envolvidas na replicação viral, a proteína de movimento 2B e, em menor extensão, a proteína de revestimento 2C não foram confinadas ao compartimento viral, mas foram transportadas em direção à periferia da célula, um achado consistente com seu papel na célula para movimento celular de partículas de vírus.

Os cachos de frutos são reduzidos em vigus e em número com maturação irregular. A perfeita co-localização de dsRNA e sinais de RNA neossintetizados dentro de agregados de ER, juntamente com a exclusão desses agregados do Golgi que permaneceram essencialmente não afetados, nos leva a concluir que o ER é o principal contribuinte para a morfogênese do compartimento viral onde ocorre a replicação do vírus .

A replicação do vírus Grapevine Fanleaf ocorre em membranas derivadas do retículo endoplasmático

Marcação e detecção de RNA nascente. Tratamento com BFA e cerulenina. O procedimento foi adaptado de Bienz et al. Para o FDA, os parâmetros foram os seguintes: Essas rosetas eram muito semelhantes em morfologia e tamanho às isoladas por ISEM de células 45 infectadas com poliovírus. As células foram colhidas às 48 h p. Recebido em 27 de dezembro Aceito em 3 de junho.

Doença de degeneração em folha de leque da videira - tensão

O efeito citopatológico específico da infecção por GFLV culminou na depleção quase completa do RE cortical acompanhado por um aumento progressivo de agregados de ER induzidos pelo vírus perinuclear.

Um sinal de fundo fraco devido aos anticorpos anti-VPg foi ocasionalmente encontrado na periferia da célula.

Tal paralelismo não é inesperado, uma vez que CPMV e GFLV pertencem à mesma família e compartilham muitas características viruw, entre elas uma organização genômica semelhante 2. Além disso, as pilhas de Golgi estavam restritas à periferia desses agregados. Fig.


Uva (Vitis spp.) - Doenças de vírus

As áreas descoloridas nas folhas expandem e coalescem com o tempo para se tornarem manchas avermelhadas ou púrpura-avermelhadas que são notavelmente aparentes no final da temporada. Embora esta folha possa ser confundida com o folículo da doença do vírus, o teste foi negativo para o folículo e positivo para mancha vermelha.

OSU Plant Clinic Image, 2013.

Sintomas de mancha vermelha em Pinot Noir (duas imagens superiores) de Willamette Valley e Merlot (duas imagens inferiores) de Rogue Valley.

Observe os sintomas do folículo foliar nas folhas.

OSU Extension Plant Pathology Slide Collection, 1969.

Causa Os vírus associados à doença do folículo da videira e à doença da casca de cortiça foram encontrados nos vinhedos de Oregon e Washington. A doença da folhagem se espalha através de insetos vetores, enquanto a casca cortiça não se move nos vinhedos ou se move muito lentamente. Dos vírus associados à doença do leafroll, o GLRaV-3 foi o vírus mais freqüentemente encontrado nas pesquisas. A cochonilha da uva, mostrada em Washington e na Califórnia, transmite esse vírus. Esta cochonilha é comum no sul do Oregon, leste do Oregon e nas áreas de produção do rio Columbia. Portanto, é fundamental que os produtores usem apenas madeira certificada ao estabelecer os vinhedos. Todas as uvas que entram em Oregon e Washington estão em quarentena e devem ser certificadas como livres de vírus leafroll. À medida que mais trepadeiras são enxertadas em porta-enxertos para proteção contra a filoxera, esses vírus se tornarão mais prejudiciais se se estabelecerem. Folhas de folha podem causar sintomas em plantas não enxertadas, mas pode causar necrose de união de enxerto em plantas enxertadas, assim como casca de cortiça. As cultivares de Vitis vinifera com casca cortiça não apresentam sintomas até serem enxertadas em porta-enxertos americanos.

O vírus Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV) está em Oregon e Washington e não está listado como vírus em quarentena. Ele continua sendo um componente importante do programa de certificação de Washington, embora Califórnia, Canadá, França e Alemanha não tenham esse vírus listado como restrito em seus esquemas de certificação. É geralmente aceito que o RSPaV é um vírus menor, embora seu efeito em infecções mistas ou múltiplas não seja claro.

Sete vírus transmitidos por nematóides (Nepovírus) são conhecidos por infectar videiras na América do Norte, incluindo: vírus do mosaico Arabis, vírus Blueberry leaf mottle, vírus Grapevine fanleaf, vírus do mosaico da roseta de pêssego, vírus da mancha do tabaco, vírus do anel preto do tomate e vírus da mancha do tomate. Em uma pesquisa de vinhedos em Oregon conhecidos por ter nematóides Xiphinema americanum, apenas o Tomato ringspot virus foi detectado e apenas em alguns vinhedos no Vale Willamette. No entanto, o Tobacco ringspot virus e o Grapevine fanleaf virus foram detectados em vários vinhedos no Vale Yakima, em Washington, em plantas que exibiam sintomas de degeneração / declínio em fanleaf. Não se espera que a folha em leque seja um problema no PNW, uma vez que o vetor, índice X, não foi encontrado em levantamentos em Oregon e Washington. Da mesma forma, o vetor nematóide do vírus do mosaico Arabis não é amplamente distribuído na América do Norte. Todas as videiras que entram em Oregon e Washington devem ser certificadas como livres desses Nepovírus.

Uma nova doença causada pelo Grapevine red blotch virus (GRBV) foi relatada pela primeira vez em 2012. A descoberta ocorreu quando videiras com sintomas de folhas vermelhas que deram resultado negativo para Grapevine leafroll-associated virus (1-10) (GLRaV) foram analisadas para possíveis novos vírus . GRBV é o membro tipo do novo gênero Grablovirus, da família Geminiviridae, que é transmissível por enxerto. Todas as videiras que entram em Oregon e Washington devem ser certificadas como livres do GRBV.

Sintomas Leafroll, também chamado de folha vermelha ou doença do imperador branco, avermelhar a folhagem inferior de cultivares de frutas escuras em setembro e outubro. A folhagem de cultivares de frutas brancas pode amarelar nesta época. Outros sintomas incluem foliação atrasada na primavera, diminuição das folhas, produção de menos cachos menores de bagas abaixo do normal em sólidos solúveis e crescimento menos vigoroso da videira em circunstâncias adversas. As uvas de cultivares de frutas vermelhas não colorem bem quando infectadas com GLRaV. Os sintomas de deficiência de potássio imitam muitos dos sintomas causados ​​pelo GLRaV. A eliminação de veias associada à doença do folículo foliar pode ser usada para discriminá-la da descoloração foliar semelhante causada por outros fatores de estresse.

Mancha vermelha - Em cultivares de winegrape vermelha, esses sintomas aparecem inicialmente como pequenas áreas irregulares de cor vermelha entre as nervuras principais nas folhas maduras na porção basal da copa das videiras afetadas, e os sintomas se desenvolvem nas folhas mais acima nos colmos conforme a temporada avança . As áreas descoloridas nas folhas se expandem e coalescem com o tempo, tornando-se manchas avermelhadas ou púrpura-avermelhadas que são notavelmente aparentes no final da temporada. Em algumas cultivares, as veias tornam-se vermelhas em contraste com as veias verdes geralmente observadas na doença do folículo da videira. No entanto, os sintomas desta doença podem ser confundidos com a doença do folículo da videira. Nesta época, parece haver uma variação considerável no grau de avermelhamento dependendo da cultivar e do porta-enxerto. Relatórios do impacto do GRBV nas mudanças na qualidade do fruto variam amplamente com reduções de Brix de 0 a 5 relatadas, bem como mudanças no pH e no perfil fenólico do suco. As cultivares brancas positivas para o vírus não exibiram o sintoma de vermelhidão das folhas e, no caso do Chardonnay, as folhas desenvolveram amarelecimento e alguma necrose no final da temporada o suco foi afetado de forma semelhante às uvas vermelhas.

Todos os nepovírus estão associados a frutificação pobre em videiras. Aglomerados soltos e abundantes pequenas bagas caracterizam a infecção pelo vírus. O vírus da mancha anelar do tomate pode causar uma necrose da união do enxerto em videiras enxertadas e pode resultar no declínio das plantas, levando à morte das plantas em 3-5 anos.

Os sintomas da folha em folha são mais bem vistos no início da estação de crescimento. O crescimento novo em videiras infectadas geralmente é diminuído em colmos fracos, achatados e tortos. As folhas novas são mosqueadas e deformadas, mostrando dentação excessiva (borda da folha com dente de serra anormal) e um seio largo no pecíolo. Juntos, esses sintomas se assemelham a um ventilador parcialmente fechado, muito parecido com a lesão do 2,4-D. Algumas cepas causam padrões amarelos brilhantes nas folhas, geralmente sem a deformação foliar associada a outras cepas do vírus da folha em leque da Grapevine. O Grapevine yellow vein virus é outra cepa, que produz distintas faixas amareladas ou esbranquiçadas ao longo das nervuras das folhas na maior parte da estação. A distribuição da cepa amarela parece ser muito limitada neste momento.

A casca cortiça causa o desenvolvimento de uma incompatibilidade na união do enxerto. Os sintomas da folha se assemelham aos do folículo, mas são mais graves em alguns porta-enxertos. As folhas de cultivares como Pinot Noir podem desenvolver uma clorose amarela antes de ficarem vermelhas. A madeira na base das canas pode inchar ligeiramente, fazendo com que a casca se rache. Dependendo da cultivar, vários sulcos de madeira também podem ocorrer. Em videiras com enraizamento próprio, os sintomas da casca cortiça são muito leves.

Suspeita-se que o vírus associado à picada do tronco Rupestris cause um declínio lento de Vitis vinifera. As videiras afetadas são menores do que as saudáveis, mas as folhas parecem normais. Amadurecimento atrasado e rendimentos reduzidos têm sido associados a este problema. Os porta-enxertos de V. rupestris e seus híbridos desenvolvem corrosão no xilema, observada em tecidos lenhosos após a remoção da casca. Facilmente confundido com sintomas de casca de cortiça. Em videiras auto-enraizadas, RSPaV intensifica os sintomas associados à doença foliar.

  • Plante um estoque saudável. Apenas estacas não enraizadas certificadas como livres de folha em leque e folhagem podem ser enviadas para Oregon e Washington. Estão disponíveis clones da maioria dos porta-enxertos e cultivares testados e considerados livres de todos os vírus conhecidos.
  • Grapevine fanleaf virus, Tobacco ringspot virus e Tomato ringspot virus são transmitidos no solo por certos nematóides do gênero Xiphinema, mas o vetor de fanleaf (índice X.) não foi encontrado no PNW. Raízes de videiras velhas infectadas com folha em leque persistem muitos anos no solo e servem como reservatórios desses vírus. Portanto, não replante uvas em solo infestado por 10 anos, a menos que você use procedimentos especiais de pousio e fumigue profundamente.
  • O controle de cochonilhas e escamas é importante em vinhas com folíolos confirmados. Veja o Manual de Manejo de Insetos PNW para detalhes.
  • Remova e destrua videiras infectadas com vírus.
  • Manter a saúde e o vigor do vinhedo por meio de boa nutrição, irrigação adequada e redução da carga da colheita para reduzir o estresse físico e ambiental.


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Detecção de múltiplas variantes do vírus Grapevine Fanleaf em nematóides de índice Xiphinema único

Detecção específica do vírus da folha em leque da videira (GFLV) RNA-1 (a) e RNA-2 (b) por RT-PCR em videiras e nematóides (P: Pool de 30 nematóides ei: nematóide único). L corresponde à escada e + e - ao controle positivo e negativo, respectivamente. O tamanho de cada produto é indicado em pares de bases (bp) no lado esquerdo de cada gel.

Composição de variantes de GFLV determinada por polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição (RFLP) em amplicons de RT-PCR específicos para RNA-1 e RNA-2, de videiras VA6, VA7 e VA8 e de nematóides que se alimentaram dessas videiras (P: Pool de 30 nematóides e i: nemátodos únicos). O comprimento teórico (em bp) dos diferentes fragmentos gerados pela digestão de restrição para o amplicon 1 (a) e o amplicon 2 (b) foi determinado para cada variante molecular da sequência montada de novo de GFLV. Perfis de RFLP observados para os amplicons 1 (c) e 2 (d). O tamanho em pares de bases (bp) da escada de 100 bp da Promega, está indicado no lado esquerdo de cada gel. Mix corresponde a uma amostra artificial contendo quantidades equimolares de extratos de RNA total de VA6, VA7 e VA8. O fragmento não esperado para o fragmento VA8 2 é mostrado (*). Três tipos diferentes de perfis de RFLP (A, B e C) observados para o amplicon 2 para nematóides individuais são indicados abaixo do painel.

Comparação dos perfis de RFLP e carga viral de oito diferentes amostras de folhas e raízes de duas estacas de videira (VA6-A e VA6-B). O comprimento teórico dos diferentes fragmentos gerados pela digestão de restrição para o amplicon 1 (a) e o amplicon 2 (b) foi determinado para cada variante molecular de GFLV de novo montado a partir de VA6 de videira. Perfis de RFLP observados para os amplicons 1 (c) e 2 (d). O tamanho em pares de bases (bp) é indicado no lado esquerdo de cada gel. A carga viral (e) estimada por quantificação absoluta de RNA-1 por RT-qPCR foi expressa em moléculas / ng de RNA total, conforme descrito anteriormente [32]. As relações entre as amostras de um mesmo tecido e de uma mesma planta foram calculadas usando como denominador a amostra com a menor quantidade viral. A média e o erro padrão foram calculados dentro de um compartimento (folha ou raiz) por planta, permitindo a comparação direta entre órgãos e plantas.

Árvores filogenéticas baseadas no método Neighbor Joining após o alinhamento das sequências correspondentes ao amplicon 1 (a) e amplicon 2 (b). As sequências obtidas de plantas infectadas estão em cinza para as sequências de GFLV conhecidas recuperadas do GenBank e em negrito para aquelas de nossas três fontes de videira (VA6, VA7 e VA8), conforme deduzido de nossas análises de RNAseq. As sequências adquiridas de nematóides e obtidas por sequenciamento Sanger de clones de amplicons são apresentadas em verde (pool de 30 nematóides P1 e P2), em vermelho (nematóide único i9) e em azul (nematóide único i11). As tabelas resumem a distribuição de Variantes moleculares de GFLV e clones em cada clado. A composição das variantes moleculares do GFLV deduzida do RNAseq para cada planta é representada em preto. Para os nemátodos, é utilizado o mesmo código de cor que o anterior (verde, vermelho e azul) e são apresentadas as proporções dos clones pertencentes a um clado (sobre o número total de clones sequenciados para cada amostra).


Grapevine fanleaf virus (GFLV) - anticorpos específicos conferem GFLV e Vírus do mosaico Arabis (ArMV) resistência em Nicotiana benthamiana

Instituto de Biotecnologia Molecular (Biologia VII), RWTH Aachen University, Worringerweg 1, 52074 Aachen, Alemanha

RLP AgroScience GmbH, AIPlanta - Institute for Plant Research, Breitenweg 71, 67435 Neustadt a.d. Weinstraße, Alemanha

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RESUMO

Grapevine fanleaf virus (GFLV) é um dos patógenos mais destrutivos da videira. Neste estudo, geramos anticorpos monoclonais que se ligam especificamente à proteína capsidial do GFLV. Anticorpo FL3, que se ligou mais fortemente ao GFLV e mostrou reatividade cruzada com Vírus do mosaico Arabis (ArMV), foi usado para construir o fragmento de anticorpo de cadeia única scFvGFLVcp ‐ 55. Para avaliar o potencial deste fragmento variável de cadeia única (scFv) para conferir resistência ao vírus mediada por anticorpos, transgênicos Nicotiana Benthamiana plantas foram geradas nas quais o scFv se acumulou no citosol. Foram alcançados níveis de proteína recombinante de até 0,1% de proteína solúvel total. O T1 e T2 as progênies conferiram proteção parcial ou completa contra GFLV no desafio com o patógeno viral. A resistência ao GFLV em plantas transgênicas foi estritamente relacionada aos níveis de acumulação de scFvGFLVcp ‐ 55, confirmando que o fragmento de anticorpo era funcional in planta e responsável pela resistência GFLV. Além disso, as plantas transgênicas que conferem proteção completa ao GFLV mostraram tolerância substancialmente aumentada ao ArMV. Demonstramos o primeiro passo para o controle da degeneração em folha em leque da videira, pois o scFvGFLVcp ‐ 55 pode ser um candidato ideal para mediar a resistência ao nepovírus.


Assista o vídeo: 2021 CCOVI Lecture Series - Sudarsana Poojari